公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

1、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml 培養(yǎng)

液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀細胞用 1-2ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細胞

培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

2、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終

止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。使用程序

降溫盒可直接放入-80℃。

二、細胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。

b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

三、培養(yǎng)注意事項 

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。     收到細胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

MAGEB1： 黑色素瘤相關(guān)抗原B1抗體 KM小鼠網(wǎng)織細胞肉瘤瘤株;LⅡ

MFC-GFP(小鼠前胃癌細胞(綠色熒光蛋白標記)) 5×106cells/瓶×2 CTLL-2(T細胞) 大鼠血管生成素2(ANG-2)ELISA試劑盒 BALP  大鼠骨堿性0酸酶 96T

MCM5： 染色體維持缺陷蛋白5抗體 SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細胞;COS-7

IFNA4 Protein Mouse 重組小鼠 IFNA4 / Ierferon alpha-4 蛋白 (Fc 標簽) 大鼠血管生成素2(ANG-2)ELISA 試劑盒 Sophora japonica agglutinin,SJA  槐凝集素 96T

MACC1： 結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白1抗體 FANCA Others Human 人 FANCA / FACA 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

Phospho-Histone H2A.X (Tyr143)： 0酸化組蛋白H2AX抗體 CL-0154MDCK(犬腎細胞)5×106cells/瓶×2

SK-MEL-1細胞，人皮膚黑色素瘤細胞 德氏乳桿菌乳酸亞種 人十二脂腸腺癌;HuTu-80 人骨退化特異標志物(CTX-2)ELISA 試劑盒 Collagen I(Anti-Collagen Type I) I型膠原蛋白 0.5mg

Phospho-HSP27 (Ser254)： 0酸化熱休克蛋白27抗體 HA Others H1N3 甲型流感 H1N3 (A/duck/NZL/160/1976) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照)

非洲綠猴腎細胞系/IgRCD4+;VERO/IgRCD4+ 人骨特異性堿性0酸酶B(ALP-B)ELISA 試劑盒 Collagen V (Anti--Collagen Type V ) Ⅴ型膠原(多肽) 0.5mg

phospho-HSP70(Tyr41)： 0酸化熱休克蛋白70抗體 SV40T轉(zhuǎn)化的人胚腎細胞;293T

Karpas-299人間變性大細胞淋巴瘤細胞小鼠淋巴瘤細胞;EL4 大鼠干擾素γ(IFN-γ)ELISA試劑盒 Human Tetanus Antibody  人破傷風(fēng)抗體 牛源細胞

人腎小管上皮細胞;HKC 人肺大靜脈平滑肌細胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠干擾素γ(IFNγ)ELISA試劑盒 TGF- Alpha  大鼠轉(zhuǎn)化生長因子α 96T

phospho-PRKCQ(Ser676)： 0酸化蛋白激酶C theta抗體 人結(jié)膜上皮細胞HConEC

PRL Protein Mouse 重組小鼠 PRL / Prolactin 蛋白 (His 標簽) 大鼠干擾素β(IFNβ)ELISA試劑盒 PROG  大鼠孕激素/孕酮 96T

phospho-PRKCQ(Ser695)： 0酸化蛋白激酶C theta抗體 ANGPTL7 Others Cynomolgus 食蟹猴 ANGPTL7 / Angiopoietin-like 7 人細胞裂解液 (陽性對照)