公司產品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

1、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml 培養(yǎng)

液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀細胞用 1-2ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細胞

培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

2、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終

止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h 后轉入液氮中進行長期保存。使用程序

降溫盒可直接放入-80℃。

二、細胞培養(yǎng)操作

1) 復蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主。將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數。

b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

三、培養(yǎng)注意事項 

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象 發(fā)生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現問題，責任由 客戶自行承擔。

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通 交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。     收到細胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公司正在出售的產品：

CL-0300NCI-H661(人大細胞肺癌細胞)5×106cells/瓶×2 大鼠胃泌素(GAS)ELISA試劑盒 sTLR6  大鼠可溶性Toll樣受體6 96T

phospho-MEF2D(Ser180)： 0酸化肌細胞特異性增強因子2D抗體 小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-B6

NEC(人食管癌細胞) 5×106cells/瓶×2 NIH/3T3(胚胎成纖維細胞) 大鼠胃動素受體(MTLR)ELISA試劑盒 VEGF-D(Human Vascular Endothelial cell Growth Factor D)  人血管內皮細胞生長因子D 96T

phospho-MEF2D(Ser444)： 0酸化肌細胞特異性增強因子2D抗體 KM小鼠未分化神經膠質瘤瘤株;B22

IL36RN Protein Mouse 重組小鼠 IL1F5 / IL1RP3 蛋白 大鼠胃動素(MTL)ELISA試劑盒 VEGF-C(Human Vascular Endothelial cell Growth Factor C)  人血管內皮細胞生長因子C 96T

IPMK： 多0酸肌醇激酶IPMK抗體 NP Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) Nucleocapsid / NP 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

人淋巴成纖維細胞培養(yǎng)基 100mL 人垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽(PACAP)ELISA 試劑盒 IL-4(Interleukin-4) 白介素4抗原 0.5mg

IKAP： IKK復合物相關蛋白抗體 非洲綠猴腎細胞;Vero E6 人類惡性黑色素瘤，A375細胞 LS 174T(結腸腺癌細胞)

PTPN11 Others Mouse 小鼠 SHP2 / PTPN11 人細胞裂解液 (陽性對照) 人垂草扁桃酸(VMA) ELISA 試劑盒 IL-4(Interleukin-4)human peptide 白介素4抗原 0.5mg

IQSEC2： IQSEC2抗體 CM-R095大鼠成年表皮角質形成層細胞培養(yǎng)基100mL

OCM 1A人眼膜絡黑色素瘤細胞EPHB1 Others Mouse 小鼠 EPHB1 / EPHT2 人細胞裂解液 (陽性對照) 大鼠彈性蛋白(ELN)ELISA試劑盒 17-OHP(Human 17-Hydroxyprogesterone)  人17羥孕酮 96T

phosphos-PCNA (Tyr211)： 0酸化增殖細胞核抗原抗體 盤羊皮膚細胞;ASHS2

RLF, 大鼠淋巴成纖維細胞 大鼠膽囊收縮素八肽(CCK-8)ELISA試劑盒 Human Tri-iodothyronine  人狀腺原酸 96T

phospho-AMPK beta 1 (Ser182)： 0酸化腺苷單0酸活化蛋白激酶β1抗體 IGFBP4 Others Mouse 小鼠 IGFBP4 人細胞裂解液 (陽性對照)

人胚胎眼鞏膜成纖維細胞;HFSF 大鼠膽囊收縮素八肽(CCK8)ELISA試劑盒 Human thyroxineT4  人甲狀腺素 96T