公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

1、細(xì)胞傳代：

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 培養(yǎng)

液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀細(xì)胞用 1-2ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細(xì)胞

培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

2、細(xì)胞凍存：

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終

止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。使用程序

降溫盒可直接放入-80℃。

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細(xì)胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

公司正在出售的產(chǎn)品：

IL1RN Protein Rat 重組大鼠 IL-1RA / IL1RN 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) 大鼠相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)ELISA 試劑盒 CACT  大鼠肉毒堿脂酰轉(zhuǎn)移酶 96T

MAdCAM-1： 粘膜血管定居因子抗體 PAK3 Others Human 人 PAK3 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠腺苷酸環(huán)化酶1(AC-1)ELISA試劑盒 C3a (Rabbit Complement fragment 3a)  兔子補(bǔ)體片斷3a 96T

Maspin： 抑癌基因抗體 SMC-1細(xì)胞，胸膜細(xì)胞瘤 早幼粒急性白血病細(xì)胞系,HL-60細(xì)胞 小鼠子細(xì)胞;U14

HA Others H12N1 甲型流感 H12N1 (A/mallard duck/Alberta/342/1983) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 大鼠腺苷受體A2a(ADORA2A)ELISA試劑盒 LZM(Mouse Lysozyme)  小鼠 96T

HCMV UL49： 人巨細(xì)胞病毒UL49蛋白抗體 動(dòng)物上皮細(xì)胞生長(zhǎng)添加物-aEpiCGS-2-a

PPBP Protein Human 重組人 NAP-2 / PPBP / CXCL7 蛋白 (His 標(biāo)簽) 人二0酸腺苷(ADP)ELISA 試劑盒 FSH-R(Follicle-stimulating hormone receptor precursor) 促卵泡刺激素受體抗原 0.5mg

HLA E： 人類白細(xì)胞抗原E抗體 NGF Others Mouse 小鼠 β-NGF / Beta-NGF CHO細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

人甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 人二級(jí)淋巴組織趨化因子(SLC/CCL21)ELISA 試劑盒 FSH(Follicle-stimulating hormone precursor) 促卵泡刺激素抗原 0.5mg

HECTD3： E3連接酶抑制素受體3抗體 荷蘭黑白花奶牛牛肺細(xì)胞;DCL1 肺腺癌細(xì)胞，SPA-A1細(xì)胞 SCaBER(膀胱鱗癌細(xì)胞)

MKN-74人胃癌細(xì)胞SERPINF1 Protein Human 重組人 SerpinF1 / PEDF 蛋白 (His 標(biāo)簽) 大鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISA試劑盒 NADPH  大鼠酰胺腺二核苷酸0酸 96T

P英文名稱： 親環(huán)蛋白(親環(huán)素)PPIG抗體 STATH Others Human 人 Statherin / STATH 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

MuM-2B 人眼脈絡(luò)黑色素瘤細(xì)胞 大鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISA 試劑盒 MN(Human metanephrine)  人變 96T

Phospho-P(Ser376)： 0酸化親環(huán)蛋白(親環(huán)素)PPIG抗體 293sars181A細(xì)胞，Sars蛋白表達(dá)株 人細(xì)胞,HBL-100細(xì)胞 腎系膜細(xì)胞培養(yǎng)基MCM-prf

FST Others Human 人 FST / Follistatin ( FS288 ) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 大鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPP4)ELISA試劑盒 D1R(Human Dopamine D1 receptor)  人多巴胺D1受體 96T

三、培養(yǎng)注意事項(xiàng) 

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。     收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) T25 瓶或者 2 個(gè) 6cm 皿。不是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè)10cm 皿。